ChIP-qPCR技术服务
产品名称： ChIP-qPCR技术服务
英文名称： ChIP-qPCR Service
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上海康成生物工程有限公司
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康成生物提供ChIP-qPCR服务，能够检测特定转录因子/组蛋白修饰与已知基因启动子区域的结合；在已知启动子范围内寻找特定转录因子/组蛋白修饰的结合位点。
ChIP-qPCR完美结合了ChIP技术和实时定量PCR技术。ChIP技术利用抗体特异性富集与特定转录因子/组蛋白修饰结合的DNA片段；qPCR技术使用SYBR荧光染料，非特异性的掺入DNA双链，发射荧光，保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步，最后利用Ct值进行定量分析。ChIP-qPCR能够专一，灵敏，快速，高重复地定量生物样品中特定转录因子/组蛋白修饰与已知基因启动子的结合。
ChIP-qPCR技术特点：
· 高特异性，针对感兴趣的基因启动子设计特异性的实时荧光定量PCR引物；
· 超宽的线性范围，可跨越7个数量级；
· 精确度高，重复性好；
· 灵敏度高
康成生物ChIP-qPCR技术服务流程：
A. 样品交联，甲醛处理细胞，交联DNA与DNA结合蛋白
B. 超声打断染色质，裂解细胞，并以超声波将染色质打断成400-500bp的片段
C. 染色质免疫共沉淀，将B所得片段分成两份，一份与特异性抗体进行免疫共沉淀(ChIP)，另一份作为Total input样品
D. DNA纯化，将C所得两份蛋白-DNA复合物解交联，纯化分离DNA片段。ChIP富集的DNA片段(ChIP DNA)，Total input样品中的DNA片段(Total input DNA)
E. 实时荧光定量PCR检测
实验数据处理
● Total input DNA样品作为模板，用待测基因特异性引物进行qPCR，检测得到Ct值(Input)
● ChIP DNA样品作为模板，用待测基因特异性引物进行qPCR，检测得到Ct值(ChIP)
● 待测基因免疫共沉淀的效率(ChIP / Total input)可通过以下公式计算：
%(ChIP / Total input) = 2^[ Ct (Input)- Ct (ChIP) ] * 100
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